尊龙凯时提供的大鼠肺泡上皮细胞L2培养说明书为研究人员的实验工作提供了详尽的指导。以下是培养条件及步骤的详细信息：

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡上皮细胞L2

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：第一次建议1:2传代，传代间隔为2天更换培养液。建议使用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡和对比培养。若对比效果不好，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，培养至良好状态，并将完全培养液灌满后封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶以消毒，然后在超净台进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存（建议40x, 100x, 200x各拍摄一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认收到状态良好。（注意：密封培养瓶放入培养箱时，盖子应拧松；传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，将培养液收集至离心管，留5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱中培养；如细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱消化1-2分钟，显微镜下观察消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速倒回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟。弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞状态，待其缩回变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，进行1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意防护），快速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2细胞培养箱继续培养。
4. 翌日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会脱落，这是正常现象。可按以下方法处理：将培养瓶内所有培养液收集至离心管，进行1000rpm离心5分钟，收集上清进行过渡培养，沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加5ml完全培养基终止处理，随后再次离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1. 尊龙凯时提供的细胞出现问题时的重发情况：
• 在运输中遭遇的问题，如细胞丢失、瓶身破损或严重漏液，可进行重发；
• 细胞污染问题：需在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发；
• 常温发货细胞静置24小时或干冰发货细胞复苏后24小时内大部分细胞未存活（需提供清晰细胞状态照片），可重发；
• 若细胞复苏后24小时或静置4小时内出现污染，且未开封，可重发；
• 细胞活性问题需在7天内提供真实实验结果，用台盼蓝染色法鉴定活力，核实后可重发；
• 细胞收到当天及第2、3天请拍照，3天内未告知视为产品合格；如4-7天内出现问题需提供三天内照片及相关操作步骤，经过技术人员确认后可重发。
2. 不予重发的情况：
• 客户造成的细胞污染；
• 错误操作导致细胞状态不良；
• 非推荐培养体系影响细胞状态；
• 未提供培养前3天照片；
• 细胞培养时经其他处理；
• 收到后的2天内未告知；
• 视具体情况而定。

选择尊龙凯时，保障您的科研细胞培养高效与安全！