尊龙凯时的大鼠肺泡上皮细胞L2培养说明书主要总结了细胞培养的相关要求和步骤，旨在确保用户能够高效、准确地进行细胞培养与管理。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡上皮细胞L2

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：首次建议1:2传代；每2天更换培养基。

备注：建议使用无菌离心管收集培养基瓶中的液体以供对比培养，若效果不佳，推荐直接购买尊龙凯时提供的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，培养至良好状态并灌满完整培养液，密封瓶口是最佳的运输细胞方式。用75%酒精喷洒细胞瓶消毒后，放入超净工作台进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，随后进行后续处理。

必须在显微镜下观察细胞生长情况，并分别拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，如未提供照片将默认收到状态良好。

注意：密封培养瓶放入培养箱时，需松开瓶盖。传代之后，建议一瓶用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自己制备的培养基以便进行对比。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，将培养液收集并放入离心管中，留5ml完全培养基在37℃、5% CO2孵箱中培养。如果细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱消化1-2分钟，并在显微镜下观察细胞状态，若大部分细胞变圆并脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，然后吸出悬液，转移至15ml离心管，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积，弃去培养液，PBS洗涤一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，轻轻观察至细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打细胞脱落，再将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，沉淀细胞，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护装备），快速放入37℃水浴解冻，直至无结晶，之后用75%酒精擦拭冻存管外部。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基并继续培养。

四、注意事项

由于有些细胞贴壁不牢，运输过程中可能会出现细胞脱落现象，这是正常的。

对应处理方法：收集培养瓶中所有培养液至离心管，1000RPM离心5分钟，上清液可用于对比培养。加入1-2ml胰酶，轻吹重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止消化，再次离心，弃去上清液，补充1-2ml完全培养基重悬。按1:2比例进行分瓶传代并补充新培养基，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1. 细胞出现问题的重发情况及判定标准：

1. 运输中细胞遭遇问题（如丢失、瓶身破损、严重漏液），可重发；
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发；
3. 常温发货细胞静置24小时后或干冰冻存发货细胞复苏24小时后，99%细胞未存活需提供细胞状态照片，可重发；
4. 复苏后出现污染，需提供相关记录和照片，可重发；
5. 活性问题需在收到产品7天内以台盼蓝染色法确认细胞活力，合格后则予以重发；
6. 收货当天以及第2、3天请拍照，未告知视为产品合格。4-7天内出现问题需提供前3天照片和详细操作步骤，经过技术人员判断后可重发。

2. 细胞出现问题不予重发的情况：

1. 因客户操作不当造成的污染，不重发；
2. 非推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不佳，不重发；
3. 未提供培养前3天照片的，不重发；
4. 因其他不当处理造成的细胞问题，不重发；
5. 超出2天未及时反馈，则不重发；
6. 其他视具体情况而定。

以上信息皆为尊龙凯时提供的大鼠肺泡上皮细胞L2培养的详细指导，确保细胞培养过程顺利有效。