### RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养指南

#### 一、细胞培养条件

细胞名称：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：建议首次1:2传代，2天后更换培养液。

备注：使用无菌离心管收集培养基瓶中的液体以进行对比培养。如对比效果不理想，建议直接购买本品牌尊龙凯时的完全培养基。

#### 二、细胞处理步骤

收到细胞后，待其达到良好状态后，进行全部培养液的灌装并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。首先，用75%酒精喷洒细胞瓶外部以进行消毒，然后在超净工作台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定状态，之后进行观察和拍照（建议拍摄40x、100x、200x的细胞对比，前三天的照片为重要依据，未提供照片默认为状态良好）。在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自主配制的基质进行对比。

#### 三、细胞培养步骤

a. 细胞传代： 当汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，留5ml培养基继续培养；当细胞密度超过80%时，进行传代：

1. 弃去培养液，用无钙、镁PBS进行1-2次清洗。
2. 添加1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察消化状况，快速终止反应后添加5ml完全培养基。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，吸出并转移到15ml离心管，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2比例分瓶传代，并添加新培养基至每瓶5-8ml，再放入细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存： 在细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并PBS清洗细胞一次，随后添加约1ml 0.25%胰蛋白酶，待细胞回缩后加入5ml完全培养基终止消化，将悬液转移至15ml离心管中并离心，弃去上清液后加入1ml无血清冻存液，混匀后置于冻存管中。

c. 细胞复苏： 从液氮中取出细胞冻存管并迅速置于37℃水浴中解冻，擦拭管外壁后转移至含5ml完全培养基的离心管，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液并用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中并放入细胞培养箱中培养。第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

由于某些细胞可能在运输过程中发生脱落，因此请注意采取以下措施：将瓶中培养液收集至离心管，离心后收集上清进行对比培养，随后按步骤执行传代。对细胞活性与质量的监控至关重要，确保文件清晰和准确。

#### 五、售后条款

尊龙凯时致力于提供优质细胞，倘若出现问题，我们的重发政策如下：

1. 由于运输导致的细胞损失、污染等问题可申请重发，需在收到后的48小时内反馈。
2. 若收到细胞后7天内内出现活性问题，请及时提供实验结果以便核实。
3. 若在收到产品前三天内未提供照片，视为产品合格处理。

请保持与技术人员的沟通，他们将帮助确认问题责任，并进行合理的后续处理。我们重视客户体验，力求提供最优质的服务。